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离子交换色谱柱的清洗与再生

[导读]离子交换色谱柱的清洗与再生

离子交换色谱柱在极端pH范围和高盐浓度条件下长时间使用, 或者分析蛋白等生物类样品后, 盐离子及蛋白质会吸附于固定相表面, 导致色谱柱分离能力下降, 柱压升高, 峰形变差.常用离子交换色谱柱的清洗与再生一般首先用纯水除去柱中盐, 然后以有机溶剂(如甲醇)除去基于分配作用吸附在填料上的杂质, 再用纯水冲洗色谱柱;或者用0.1 mol/L柠檬酸洗涤, 然后用水洗去柠檬酸 .阴、阳离子交换色谱柱性质存在一定差异, 使用不同清洗方法可能会取得更好效果.如阴离子交换柱用水、3%的H2 BO3 或NaOH(非硅胶基质)冲洗, 阳离子交换柱用水和酸冲洗.依利特及Themo公司均推荐用水※甲醇※氯仿冲洗阴离子交换色谱柱;阳离子交换色谱首先以水冲洗, 并在冲洗过程中注射4等份200 μL二甲基亚砜, 再用四氢呋喃冲洗.硅胶基质离子交换色谱柱, 限于硅胶的性质不能使用强酸或强碱清洗, 树脂离子交换色谱柱则无此限制.对树脂离子交换色谱柱, 高浓度的盐溶液(1 ~ 2 mol/L的NaCl溶液)即可恢复其大部分分离能力, 油脂等少数与树脂紧密结合的物质可用低浓度酸或碱溶液(如0.1 ~ 0.2 mol/L的NaOH水溶液, 20% ~ 40%乙酸水溶液)冲洗除去.硅胶柱可用一定程序的水溶液清洗, 亦可达到再生的目的:0.5 ~ 1.0 mol/L的盐缓冲溶液※pH为2 ~ 3的缓冲溶液※添加水溶性有机溶剂(如10% ~ 20%浓度的甲醇、乙腈、乙醇等)的缓冲溶液※添加8 mol/L尿素或非离子型表面活性剂的缓冲溶液。

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