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采用岛津LC-20AT 高效液相色谱仪测定松杉灵芝

[导读]采用岛津LC-20AT 高效液相色谱仪测定研究的方法具有较高的专属性、准确性、重现性和可行性,可作为松杉灵芝菌丝体中甘露醇和麦角甾醇含量质量控制的定量方法。

甘露醇是目前降低颅内压安全有效的首选药,其含量测定一般采用容量法和分光光度法,前者仅适合纯的甘露醇制剂,不适合中草药及保健食品中甘露醇的测定,后者本身不能完全排除干扰,且前处理显色步骤复杂。麦角甾醇可抑制肿瘤血管形成发挥抗肿瘤效应,但作为真菌发酵产物中甾醇类的生物活性作用还有很多值得人们探讨和研究的地方。故笔者建立了HPLC-RID法测定松杉灵芝菌丝体中甘露醇含量的方法和HPLC法测定松杉灵芝发酵产物中麦角甾醇含量的方法,以期为松杉灵芝发酵产物的质量评价提供依据。

试验材料LC-20AT 高效液相色谱仪(日本岛津公司);RID-10A示差折光检测器(日本岛津公司);甘露醇对照品、麦角甾醇对照品购于中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯(美国Fisher 公司),水为超纯水,其他试剂均为分析纯;松杉灵芝菌丝体及发酵液均为长春中医药大学生物工程实验室制备。

  对照品制备方法精密称取甘露醇对照品3 mg,置于2 mL容量瓶中,加超纯水溶解,定容,即得甘露醇对照品溶液(1.565 mg/mL)。

精密称取麦角甾醇对照品1 mg,置10 mL 容量瓶中,加甲醇溶解,定容,即得麦角甾醇对照品溶液(0.1 mg/mL)。

供试品制备方法

  甘露醇供试品溶液制备方法分别准确称取松杉灵芝菌丝体、发酵液样品各0.1 g,加水5 mL,精密称重,超声提取30 min,放至室温后称重,加水补足减失重量,摇匀,2000 r/min离心10 min,上清液过0.22 μm滤膜,即得。

  麦角甾醇供试品溶液制备方法分别准确称取松杉灵芝菌丝体、发酵液样品各0.5 g,置干燥具塞的三角瓶中,加入10 mL甲醇,精密称定重量,超声提取1 h,放至室温,称重,补加甲醇至原重量,滤过,取续滤液过0.22 μm滤膜,即得。

  色谱条件甘露醇标准品及松杉灵芝菌丝体的色谱条件:SUGAR SC1011色谱柱(300 mm×8 mm,6 μm),流动相为超纯水,流速0.5 mL/min,柱温70℃,进样量10 μL。麦角甾醇标准品及松杉灵芝菌丝体的色谱条件:汉邦ODS-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇,检测波长282 nm,流速1.0 mL/min,柱温30℃,进样量10 μL。


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